Есиль-Диагностик, УЗИ в Петропавловске

Что такое ПЦР

ПЦР — (Polymerase chain reaction, PCR diagnostics) - расшифровывается как полимеразная цепная реакция.

ПЦР диагностика — это метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, в частности, этот метод широко применяется и для диагностики ЗППП — заболеваний, передающихся половым путем.

Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНКвозбудителя той инфекции, которую подозревает врач. Для ПЦР-диагностики инфекций достаточно небольшого фрагмента, поскольку любая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований.

При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Это значит, что этот фрагмент ДНК «особенный» — он встречается только у этого микроба (или группы родственных микробов), но не встречается ни у одного другого микроба.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой и хронической стадии, так и задолго до того, как заболевание может себя проявить.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в 1983 году разработал Кэри Мюллис (США), за что в 1993 году он удостоен Нобелевской премии в области химии.

ПЦР анализ стал для большинства инфекций своеобразным «золотым стандартом». Большинство специалистов сталкиваются с ним практически ежедневно и не представляют без него постановку окончательного диагноза. ПЦР нередко становится единственной реакцией для выявления активных стадий заболевания в те моменты, когда не срабатывают другие бактериологические, вирусологические, иммунологические методы диагностики.

Преимущества ПЦР-диагностики в современной медицине:

• Непосредственное выявление присутствия возбудителя (а именно, специфического участка ДНК или РНК возбудителя) в исследуемом образце.
• Высокая специфичность позволяет определять уникальный участок ДНК или РНК, характерный для конкретного возбудителя, что исключает возможность ложных реакций.
• Высокая чувствительность метода ПЦР позволяет обнаружить даже единичные клетки возбудителей (вирусов, бактерий). Чувствительность ПЦР-анализа составляет 10-1000 клеток в исследуемом образце (к примеру, чувствительность иммунологических и микроскопических тестов - всего 103-105 клеток).
• Разработка универсальной методики ПЦР для обнаружения различных возбудителей. Объектом для исследования методом ПЦР служит генетический материал (ДНК, РНК) возбудителя. Методика позволяет выявлять несколько возбудителей из одной биологической пробы.
• Достаточно быстрое получение результата анализа. Полное исследование проводится за 4-4,5 часа, реже – несколько дольше.
• Возможность обнаружения патогенов до возникновения симптомов заболевания (доклиническая диагностика) и после прошедшей болезни (ретроспективная диагностика). Примером доклинической диагностики будет обследование в инкубационный период (с момента заражения до возникновения жалоб больного), а также латентная инфекция (когда симптомов нет совсем, а есть только лабораторные данные – ПЦР)

Учитывая спектр возбудителей, ПЦР-диагностика активно используется в гинекологической, урологической практике, практике инфекциониста, в пульмонологии, фтизиатрии, гастроэнтерологии, гематологии, онкологии и других.

В гинекологии ПЦР-анализы— обязательная диагностическая процедура, входящая в профиль обследований различных женских заблеваний — в первую очередь, для диагностики широкого спектра ЗППП , заболеваний передающихся половым путем.

Врач назначает анализ методом ПЦР в следующих случаях:

• в острой фазе заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП)
• при подозрении на хроническую стадию ЗППП
• для выяснения причины хронического воспаления мочеполовых путей
• при тяжело протекающей беременности
• для выявления причин бесплодия
• с целью контроля эффективности проводимого лечения антибиотиками

В диагностике инфекционных заболеваний— бактериальной или вирусной природы, включающих ИППП (инфекции, передающиеся половым путем)- анализ методом ПЦР-мазка приобрел огромное практическое значение. ПЦР-анализ вирусных инфекций позволяет изучать и исследовать как хронические, так и редкие, малоизученные заболевания.

ПЦР-анализ отлично «справляется» с обнаружением внутриклеточных паразитов и микроорганизмов, способных долгое время «скрываться» в организме человека — так называемые «скрытые» инфекции, трудно поддающиеся диагностике, но способные приносить огромный вред человеку.

В пульмонологии методы ДНК-анализа используются для диагностики рецидивирующих респираторных заболеваний, атипичной пневмонии, хронического бронхита, туберкулеза, поскольку частой причиной этих болезней являются микоплазмы и хламидии.

Материал для сдачи ПЦР-анализа и правила его забора

Материалом для ПЦР-исследования, в котором можно выявить чужеродную ДНК бактерии или ДНК или РНК вируса могут служить различные биологические среды и жидкости человека:

• соскоб эпителиальных клеток (соскоб из уретры у мужчин и у женщин, соскоб из цервикального канала)
• кровь, плазма, сыворотка крови
• биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, слюна)
• моча (используется первая порция утренней мочи)
• мокрота , плевральная жидкость (в пульмонологии)
• биопаты желудка и двенадцатиперстной кишки
• слизь и другие биологические выделения

При обследовании на инфекции, передающиеся половым путем (ИППП), у мужчин и женщин забираются выделения из половых органов, мазок или соскоб из шейки матки, мазок или соскоб из уретры (мочеиспускательного канала), моча.

Подготовка к сдаче материала и проведению ПЦР-диагностики

Практически все пациенты, которым проводится ПЦР-диагностика, вправе рассчитывать на достоверный, точный и быстрый результат, зависящий в большой степени от возможности лаборатории, профессионализма врача-лаборанта. Достоверность результатов лабораторной диагностики пцр зависит не только от опыта и профессионализма врача-лаборанта, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа. При заборе материала требуются условия, исключающие контаминацию (загрязнение) материала и, соответственно, ставящие под сомнение объективность анализа.

На самом деле ничего сложного в правильной подготовке нет. При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие правила:

• За сутки до проведения анализа не жить половой жизнью
• Сдача ПЦР анализа крови проводится натощак, т. е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку
• Для ПЦР-анализа мочи используется первая утренняя порция, собранная в чистый, стерильный контейнер

Срок изготовления

Результат ПЦР-диагностики обычно можно получить через 1,5—2 суток после сдачи анализа. Возможно получение результатов ПЦР-теста в течение одного дня.

Расшифровка результатов ПЦР

Отрицательный результат ПЦР указывает на то, что в исследуемом материале на момент его сдачи не обнаружено никаких следов инфекционных агентов. Большинство случаев показывает отсутствие инфекции, которую пытались найти в исследуемой пробе.

Положительный результат ПЦР указывает на выявление следов инфекции в исследуемой биологической пробе. С большой точностью положительный результат указывает на наличие инфекции в данный момент времени.

Существуют ситуации, когда ПЦР оказывается положительной, а об активной инфекции говорить нельзя – это так называемое «здоровое носительство» без клинических симптомов болезни, которое не требует лечения, но требует динамического наблюдения у врача. Наблюдается чаще при ряде вирусных инфекций (ВПЧ, ЦМВИ, ВЭБ-инфекция, герпетическая инфекция и другие) в таких материалах как слюна, соскоб цервикального канала, уретры, то есть из местного очага. Однако нельзя забывать, что передача инфекции от носителей здоровым людям возможна, как и возможен переход в хроническую форму болезни с активацией процесса. Если же ПЦР положительна в крови, то это уже не носительство и требует специфического лечения.

Для ПЦР анализа существует 3 определения:

1. Точность (с высокой долей вероятности возможно выявление или отсутствие инфекции).
2. Специфичность (точность выявления конкретной инфекции).
3. Чувствительность (даже при низком содержании генетического материала возбудителей в исследуемом образце инфекция будет обнаружена).

Полимеразно-цепная реакция практически не выдает ложноположительных результатов (то есть не бывает положительных проб там, где инфекция отсутствует). Ложноотрицательные результаты наблюдаются редко (чаще это связано с отсутствием активной инфекции у человека в данный момент). Например, латентная инфекция, хроническая инфекция вне активности.